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Guide : choisir ses marqueurs fluorescents de la surface cellulaire dans les cellules vivantes ou fixées


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La coloration membranaire est très utile pour étudier la délimitation des cellules, la morphologie, le suivi ou la filiation des cellules, dans les études par imagerie multicolore. Les chercheurs sont toujours à la recherche de colorants appropriés à utiliser dans diverses conditions de viabilité, de fixation et de colorations expérimentales dictées par leur application.
FluoProbes® offre un large choix de colorants hautement fluorescents et photostables pour visualiser les structures cellulaires dans les expériences de marquages multicolores. Cet article présente 4 types de marqueurs les plus utiles pour colorer la surface des cellules :

① Colorants classiques :  DiO, DiI, DiA, DiD, DiB et DiR

Schema Colorants ClassiquesLes colorants carbocyanines lipophiles marquent les membranes dans une grande variété de cellules vivantes ou fixes. Procédure de coloration simple, les colorants peuvent être ajoutés directement aux milieux de culture normaux des cellules adhérentes ou en suspension. La coloration est non toxique et stable, avec très peu de transfert de colorant entre les cellules, ce qui les rend aptes au marquage cellulaire, au suivi des populations de cellules en mélange et aux études de fusion cellulaire.

Les cellules peuvent être fixées au formaldéhyde avant ou après la coloration, mais cette dernière tolère mal la perméabilisation ou la fixation au méthanol. Les colorants ne sont donc pas faciles à combiner avec la coloration intracellulaire par immunofluorescence (IF). Les colorants ne fonctionnent pas sur les bactéries ou les levures. Ils sont disponibles du bleu au proche infrarouge :

DIB, blue dye (353/442nm)FP-YS286010 mg
DIO, DIOC18(3) (484/501nm)FP-46805A50 mg
DiA (491/613nm)FP-66096A25 mg
Dil, DiIC18(3) (551/566nm)FP-46804A50 mg
DiD, DilC18(5) (644/663nm)FP-22574A50 mg
DiD, DilC18(5) oil for microinjection (644/663nm)FP-92909A25 mg
DiR, DilC18(7) (748/780nm)FP-69084A25 mg

 

Bibliographie :

BMC_Cell_Biology_interchim_blog1118Khan, J. et al., Aurora kinase-C-T191D is constitutively active mutant, BMC Cell Biology, 13:8 (2012)
 Radiation_Research_interchim_blog1118Lacoste-Collin L. et al., Effect of Continuous Irradiation with a Very Low Dose of Gamma Rays on Life Span and the Immune System in SJL Mice Prone to B-Cell Lymphoma, Radiation Research, Volume 168, Issue 6 (2007)
 BioMed_Research_International_interchim_blog1118Pacor S. et al., Effects of Two Fullerene Derivatives on Monocytes and Macrophages, BioMed Research International, 915130, 13 pages (2015)
 Protein_&_Peptide_Letters_interchim_blog1118Pelillo C. et al., Cellular Internalization and Cytotoxicity of the Antimicrobial Proline-rich Peptide Bac7(1-35) in Monocytes/Macrophages, and its Activity Against Phagocytosed Salmonella typhimurium, Protein and Peptide Letters, Volume 21, Number 4, pp. 382-390(9) (2014)
 Journal_of_Physical_Chemistry_interchim_blog1118Revillod G. et al., Multipolar Contributions to the Second Harmonic Response from Mixed DiA−SDS Molecular Aggregates, J. Phys. Chem. C, 112 (7), pp 2716–2723 (2008)
 Tianqing_Xiong_interchim_blog1118Tianqing Xiong et al., Contamination of Phenylobacterium in several human and murine cell cultures, Acta Microbiologica Sinica, 55(2): 176-186 (2015)

 

② Colorants carbocyanines plus lipophiles : Neuro-DiI, Neuro-DiO

Les colorants FluoProbes® carbocyanines sont conçus pour une diffusion plus rapide dans les membranes cellulaires. Cette propriété est particulièrement utile pour marquer les neurones dans les tissus.

Neuro-DiO, better solubility in membranes (484/501nm)FP-AM331A25 mg
Neuro-DiO in vegetable oil for microinjection (484/501nm)FP-BA641A0,2 ml
FAST DiO Solid; DiO 9,12-C18(3) (485/500nm)FP-96427A5 mg
Neuro-DiI Fast Plasma Membrane Dye (549/565nm)FP-AM330A25 mg
FAST DiI oil for microinjection; DiID9,12-C18(3),
Dilinoleyl DiI (549/565nm)
FP-87188A5 mg
FAST DiI solid; DiI 9,12-C18(3) (550/565nm)FP-12792A5 mg

 

③ Marqueurs de surface cellulaire pouvant être fixées : FP Membrane Marker FX

Ces marqueurs contiennent une amine aliphatique pour pouvoir être fixée par réaction d’un aldéhyde (formaldéhyde, glutaraldéhyde…). Cette série des FPMMarkers complète ainsi les carbocyanines lipophiles, peu compatibles avec la fixation des cellules.

FP Membrane Marker 1-43 FX (510/626nm)FP-T2982A1 mg
FP Membrane Marker 1-44 FX (480/598nm in membranes)FP-AN100A1 mg
FP Membrane Marker 2-10 FX (506/620nm)FP-AM307A1 mg

Bibliographie :

BBA_interchim_blog1118Bucki R. et al., Involvement of the Na+/H+ exchanger in membrane phosphatidylserine exposure during human platelet activation,
BBA – Molecular and Cell Biology of Lipids, 1761:2, p. 195-204 (2006)

 

④ Lectines marquées pour la coloration de la surface cellulaire : WGA et Con A

Conjugués à nos colorants FluoProbes® brillants et photostables, les lectines marquent les glycoprotéines à la surface des cellules vivantes ou fixées. La coloration à la lectine peut également résister à la fixation et à la perméabilisation. Dans les cellules pré-fixées et perméabilisées, les lectines colorent à la fois la surface cellulaire et les organites des voies sécrétoires.
Les lectines WGA et Con A sont largement utilisées pour la coloration de la surface cellulaire dans les cellules de mammifères et sont également utiles pour les colorations de bactéries Gram+ et les levures. La coloration à la lectine peut être dépendante du type de cellule.

FluoProbes® 350 – WGA (353/432nm)FP-A0IKZ05 mg
FluoProbes® 488 – WGA (494/517nm)FP-B0E9G01 mg
FluoProbes® SR101-Con A (583/603nm)FP-MT00005 mg
FluoProbes® 647H – WGA (655/676nm)FP-B0E9F01 mg

Bibliographie :

AEM_interchim_blog1118Midelet G. et al., Transfer of Microorganisms, Including Listeria monocytogenes, from Various Materials to Beef, Appl Environ Microbiol. 68(8): 4015–4024 (2002)

 

Les références et les fiches techniques des Fluoprobes® sont disponibles en ligne sur www.interchim.com.

Pour tout renseignement complémentaire, vous pouvez contacter notre support technique au 04 70 03 73 06 ou par email à interbiotech@interchim.com.