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Anticorps de Lama et protéines taggées IgG Fc de lama


LamaLes anticorps de camélidés fournissent des outils biotechnologiques uniques en recherche (Anticorps entiers ‘hcAbs’, et fragment VHH ou ‘Nanobodies’), avec des applications prometteuses du diagnostique au thérapeutique.

Un peu d’histoire à propos des nanocorps

En 1993, de jeunes chercheurs ont découvert une nouvelle classe d’anticorps à domaine unique chez des chameaux. Ce nouveau type d’anticorps à chaîne lourde (hcIGs ou hcAbs) contient un seul domaine variable (VHH) et deux domaines constants (CH2, CH3). Cette forme rare d’anticorps se prête à la production du fragment spécifique VHH, le nanocorps qui est une alternative fascinante aux anticorps conventionnels.
Ces nanocorps peuvent être produits par immunisation classique d’animaux camélidés, mais aussi par génie génétique.
Ils présentent un intérêt tant en recherche (de l’analyse in vitro à l’imagerie moléculaire) qu’en diagnostic (comme sonde) et thérapeutique (comme médicament potentiel).

Principaux avantages des nanocorps :

  • En raison de leur petite taille, les nanocorps peuvent se lier à des épitopes difficiles d’accès aux anticorps traditionnels. Ils pénètrent aussi mieux les cellules et permettent de détecter ainsi des cibles intracellulaires ou masquées.
  • La stabilité des nanocorps est bien meilleure que celle des anticorps traditionnels.
  • Les nanocorps peuvent être facilement conjugués pour les fonctionnaliser
    (avec des agents fluorescents pour détecteur leur cible, avec des agents toxiques pour les adresser à des cellules et les tuer, ou avec des protéines, des résines, …)
  • Les nanocorps sont plus faciles à produire et modifier/optimiser
    par génie génétique, à partir d’une variété d’hôtes, de façon contrôlée.

Les Nanocorps sont utilisés pour leur réaction spécifique sur les antigènes cibles dans divers immunoassays, imagerie cellulaire et de l’immuno-targetting.
La partie Fc (heavy chain – non spécifique) est utilisée comme un tag (marqueur) que l’on fusionne à une protéine (recombinante) par fusion génétique. Ces LamaFc-Protéines servent d’immunogènes (pour de l’immunisation), et peuvent aussi servir comme antigène marqué dans divers immunoassays (en coating, ou en utilisant des anticorps secondaires -anti Ig de Lama-).

 

Protéines fusionnées avec les IgG Fc de lama :

Concues pour de l’immunisation (et d’autres applications: immuno-targetting, immunoassays)

  • Immunogénicité de la protéine taguée améliorée : Le tag ‘IgGFc’ a une faible immunogénicité, mais il peut favoriser la dimérisation des protéines
  • Pharmacocinétique : longue demi-vie et bonne stabilité
  • Haute pureté (Fig 1)
  • Haute activité (Fig 2)
  • Faible taux d’endotoxine (< 10 UE / mg).
Lama IgG2b Fc tag HumaineLama IgG2b Fc tag Humaine-2
Fig 1 : PD-1, Llama IgG2b Fc tag humaine (#PD1-H5259 ) sur SDS-PAGE dans des conditions dénaturantes (R). La pureté de la protéine est supérieure à 95%.BAFF His Tag humaine immobilisée, (#BAF-H5248 ) à 5 μg/mL (100 μL/puits) peut se lier à la BCMA Llama IgG2b Fc Tag Humaine, ( BCA-H5259 ) plage de 0,02-0,4 ng/mL.

 

> Liste des protéines conjuguées avec le tag lama IgG Fc (exclusif) :

MoleculeCat. No.Product DescriptionStructure
BCMABCA-H5259Human BCMA, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure BCMA
CD19CD9-H5250Human CD19 (20-291), Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure CD19
CD30TN8-5250Human CD30, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure CD30
CD38CD38-H5252Human CD38, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructureCD38
CD47CD7-H5251Human CD47, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure CD47
LAG-3LA3-H525cHuman LAG-3, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure LAG-3
PD-1PD1-H5259Human PD-1, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure PD1
PD-L1PDL-H5250Human PD-L1, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure PD-L1
Siglec-2SI2-H525aHuman Siglec-2, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure Siglec
Siglec-3CD3-H5259Human Siglec-3, Llama IgG2b Fc Tag, low endotoxinStructure Siglec-3

Accédez à plus de protéines recombinantes taggées LlamaFc.

 

Pour une utilisation future de biopanning en phage display, les protéines biotinylées correspondantes sont recommandées. Ces protéines peuvent être fixées à des surfaces recouvertes de Streptavidine (ex Microplaques ELISA) pour du criblage à haut débit.

> Liste des protéines conjuguées avec le tag lama IgG Fc (exclusif) :

MoleculeCat. No.Product DescriptionStructure
BCMABC7-H82F0Biotinylated Human BCMA / TNFRSF17 Protein, Fc Tag, Avi Tag (Avitag™)Structure BCMA Fc Avitag
CD30CD0-H82E6Biotinylated Human CD30 / TNFRSF8 Protein, Avi Tag (Avitag™)Structure CD30 Avi His Fc
CD38CD8-H82E7Biotinylated Human CD38 Protein, Avi Tag (Avitag™)Structure D38 Avi His
CD47CD7-H82E9Biotinylated Human CD47 Protein, Avi Tag (Avitag™)Structure CD47 His Avi
LAG-3CD7-H5251Biotinylated Human LAG-3, Mouse IgG2a Fc Tag, (Avitag™)Structure LAG-3 mFc Avi
PD-1LA3-H525cBiotinylated Human PD-1, (recommended for biopanning)Structure PD-1 Avi His
PD-L1PD1-H5259Biotinylated Human PDL-1/B7-H1, (recommended for biopanning), Avi Tag (Avitag™)Structure PD-L1 Avi His
Siglec-2PDL-H5250Biotinylated Human Siglec-2, Fc Tag, (Avitag™)Structure Siglec-2 Fc Avi
Siglec-3SI2-H525aBiotinylated Human Siglec-3 / CD33 Protein, (Avitag™)Structure Siglec-3 Avi His

Accédez à plus de protéines recombinantes Avi-taggées.

 

Immunoréactifs de lama :

> Anticorps secondaires de Lama

Les anticorps de lama immunisés envers des IgG de différentes espèces et purifiés par affinité puis marqués par différents marqueurs fluorescents, la biotine ou l’HRP, sont utilisés dans les immunoassays.

Llama AbAnti Mouse IgG(H+L)
Lyo(1mg) or 2mg/ml (50&500μl)
Anti Rabbit IgG(H+L)
Lyo(1mg) or 2mg/ml (50&500μl)
CF488A204542449
CF5682045520450
CF5942045620451
CF640R2045720452
CF6472045820453

 

> Anticorps de Lama immobilisés

Llama Igg Coupled 4% Agarose Beads OOIB00006, 2 ml

 

> Anticorps de Lama pour Controles

 Unconj.BIOTINFITCHRP
Control Normal Llama IgGXR-8001XR-8013XR-8005XR-8009
Control Normal Llama IgG1XR-8002XR-8014XR-8006XR-8010
Control Normal Llama IgG2XR-8004XR-8016XR-8008XR-8012
Control Normal Llama IgG3XR-8003XR-8015XR-8007XR-8011

 

> Sérum et Ig de Lama

Normal Llama serumOOIB00013, 2mlOOIB00012, 10ml
Llamma IgOOIB00043, 10mg– – –
Llamma IgGOOIB00044, 10mg– – –

 

> Anticorps secondaires anti Ig de Lama

Anti-Llama IgG (H+L)Goat antiRabbit anti
Unconjugated41R-1045, 1 mg41R-1046, 1mg
HRP43R-1284, 1 mg43R-1290, 1mg
AP43R-1281, 500 μg43R-1287, 500 μg
Biotin43R-1282, 1 mg43R-1288, 1 mg
FITC43R-1283, 1 mg43R-1283, 1 mg
Rhodamine43R-1285, 1 mg– – –
RPE13415, 1 unité– – –
APC13393, 1 unité– – –

Accédez à plus d’immunoréactifs et anticorps de Lama.

 

En savoir plus :

  • Voir l’article Nano-Anticorps
  • N’hésitez pas à nous demander des produits & services similaires: Camel/Alpaga antibodies, custom production, antibody purification …

A savoir que les VHH peuvent être produits à partir d’une large gamme d’immunogènes (nucléotides naturel ou modifié, peptide avec ou sans modification post-traductionnelle, protéine, microorganisme, haptènes…).

Cela passe par l’immunisation de lamas, puis la construction d’une bibliothèque de phage display (phages comportants l’ADNc codant pour le VHH qui sont utilisée pour présenter les VHH dans des tests), la sélection des phage/VHH d’interêt, et enfin la production (qui peut être à grande échelle).

Les nanocorps ont une plus grande stabilité que les anticorps classiques,
. conformationnelle et thermique (jusqu’à 60°C / 140°F)
. et chimique (il supportent une plus large gamme de pH).

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L’effet de la température sur la chimie de PhotoRedOx


Le contrôle de la température des réactions de photoredox n’est pas facilement réalisable. La plupart des protocoles sont décrits en utilisant un ventilateur pour maintenir la réaction proche de la température ambiante et en n’utilisant pas le ventilateur pour laisser la réaction monter en température. De plus, il y a très peu de systèmes décrits permettant à la réaction de se dérouler en-dessous de la température ambiante. Dans ce contexte, il est très difficile d’étudier l’effet de la température sur la photocatalyse de manière pratique.

PhotoRedOx TCHepatoChem a développé un appareil le PhotoRedOx TC (Température Contrôlée) qui permet ce type d’expériences faciles à mettre en œuvre en utilisant un simple circulateur de fluide refroidissant ou chauffant.
Le PhotoRedOx TC (Température Contrôlée) est compatible avec de nombreuses sources lumineuses comme par exemple les différentes LEDs EvoluChem 18W. Il dispose d’une chambre de photochimie permettant une distribution uniforme de la lumière. On peut utiliser plusieurs formats de flacons (de 0.3ml à 20ml) grâce à différents portoirs. Le réacteur de chimie en continue peut également être utilisé avec cet appareil. Sont nécessaires à l’utilisation du PhotoRedOx TC une plaque agitatrice magnétique pour assurer l’agitation et un circulateur de fluide externe afin de chauffer ou refroidir les flacons réactionnels. (les sources lumineuses, les portoirs, le réacteur de chimie en continue, la plaque agitatrice et le circulateur de fluide sont fournis indépendamment)

Dans les exemples suivants, HepatoChem montre comment l’alkylation CH utilisant un réactif BF3K peut tirer profit d’une température plus basse ; et comment l’augmentation de la température peut accroître le rendement d’une réaction de cross-coupling C-O.

 

PhotoRedOx TC (Température Contrôlée)

  • Compatible avec beaucoup de sources lumineuses (EvoluChem 18 W)
  • Chambre de photochimie permettant la distribution uniforme de la lumière
  • Compatible avec plusieurs formats de flacons (de 0.3mL à 20mL)
  • Réacteur de chimie en continue disponible
  • Agitation sur une plaque agitatrice magnétique
  • Circulateur de fluide externe nécessaire pour chauffer ou refroidir les flacons réactionnels

 

Réaction Cyclopropyl BF3K et Hydroquinine

Reaction_Cyclopropyl BF3K & Hydroquinine

Rendement de la réaction à 19°C, 28°C et 50°C

Reaction_Cyclopropyl BF3K & Hydroquinine

Détails expérimentaux : La réaction est réalisée dans la PhotoRedOx Temperaure Controlled EvoluChem avec un bain circulant de Polyethylene glycol/Eau et une LED EvoluChem 18W 6200K white pendant 2 h. Cette réaction contient 50 µmol de substrat,
1.5 équiv. de BF3K, 2 équiv. de K2S2O8, 5 équiv. TFA et 2 mol% Ir(dF-CF3-ppy)2(dtbpy) dans 0.5ml de DMSO.

 

Couplage C-O avec le cyclohexanol

Couplage_C-O_avec_cyclohexanol

Couplage_C-O_avec_cyclohexanol-2

Détails expérimentaux : La réaction est réalisée dans la PhotoRedOx Temperature Controlled EvoluChem avec une LED EvoluChem 450nm.
Réaction : 2 mol% Ir(dF-CF3-ppy)2(dtbpy), 5 mol% NiCl2-dme/dtbpy et 3 équiv. base avec 10 mol% quinuclidine. Le rendement a été déterminé par LC-UV.

En savoir plus :

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Guide : Préparation d’échantillons & filtration, comment bien choisir vos membranes pour optimiser cette étape


1. De l’importance de la filtration pour réussir vos préparations d’échantillons

Etape indispensable de la préparation d’échantillons, la filtration permet, par passage à travers une membrane spécifique, de débarrasser un fluide des particules solides qui s’y trouvent en suspension.

Elle recouvre des domaines d’application divers et variés :

  • En biologie ou biochromatographie, cette technique permet d’éliminer des virus, des bactéries voire même d’isoler d’une matrice des protéines à fortes masses moléculaires. Pour cela, des filtres stériles sont couramment utilisés.
  • En chromatographie ou en chimie, que ce soit dans le  pharmaceutique, la cosmétique, l’agrochimie ou l’environnement…, on parle de filtration de matières en suspension insolubles. L’utilisation de la filtration limite la détérioration précoce des consommables (GC-HPLC).

L’utilisation d’automates adaptés permet le traitement rapide d’un très grand nombre d’échantillons. Ainsi, il est possible de réaliser de 96 jusqu’à 384 filtrations en simultané sur une même plaque.

D’autres fabricants comme Sotax ou Zymark proposent des automates de filtration utilisant des filtres seringues à géométrie spécifique, pour la filtration d’échantillons issus de la dissolution de formulations pharmaceutiques.

Moins onéreuse, la filtration manuelle sur filtres seringues, papiers ou membranes filtrantes reste la plus utilisée dans les laboratoires pour traiter des échantillons liquides ou des solvants. Ces produits répondent aux besoins d’un grand nombre d’utilisateurs.

Les filtres sans seringue ou vial filtrant sont les dernières innovations en terme de filtration. Ils réduisent considérablement le temps de préparation des échantillons et peuvent directement s’insérer sur les auto-échantillonneurs couplés aux systèmes d’analyses.

Organigramme Filtration

 

2. Les critères à prendre en compte pour le choix de vos membranes

La porosité de la membrane définit le seuil de filtration, c’est-à-dire le diamètre maximum des particules qui pourront la traverser. Elle varie généralement entre 5 et 0,20 μm. Le choix du diamètre du filtre et de la porosité de la membrane doit toujours tenir compte du volume de l’échantillon et du type d’analyse qui sera pratiquée ultérieurement. Une porosité de filtration de 0,45 μm est nécessaire pour tous les solvants et échantillons avant une  analyse HPLC. Cette précaution limite les problèmes de montée en pression des systèmes. Pour l’utilisation de colonnes dont le diamètre de particules est inférieur à
3 μm, une filtration à 0,2 μm devient obligatoire.
En chromatographie gazeuse, l’encrassement de l’insert d’injection est limité si l’échantillon est correctement filtré.
Pour la filtration de matrices chargées, les filtres seringues munis d’un pré-filtre diminuent les problèmes de colmatage de la membrane et évitent ainsi leurs multiples remplacements durant la filtration.

 

3. Le guide de sélection

Cellulose régénérée (RC)

Membrane hydrophile ayant les mêmes propriétés que l’acétate de cellulose mais stable avec la plupart des solvants HPLC. Elle peut être utilisée pour la filtration ou le dégazage des solvants HPLC. Elle est compatible avec les solutions aqueuses dans une fourchette de pH comprise entre 2 et 12. C’est un matériau de choix pour la filtration des protéines lorsqu’un taux de récupération maximum est nécessaire, il présente un très faible taux d’adsorptions non spécifiques.


Esters de cellulose (MEC)

Membrane idéale pour filtrer les échantillons en solutions aqueuses. Faible résistance aux solvants. Avec préfiltre en fibre de verre, elle est utilisée pour la filtration des milieux de cultures et des échantillons biologiques ainsi que pour la clarification et la stérilisation des solutions aqueuses. Très faible adsorption des protéines (adsorption inférieure aux membranes PVDF et Polysulfone). Le préfiltre en fibre de verre multiplie par 3 le volume filtrable.


Nylon et Nylon Low Extractibles (LE)

Membrane fréquemment employée pour la filtration des échantillons HPLC avant injection.
Bonne résistance aux solvants. Caractéristiques hydrophiles, donne de bons résultats avec les solutions aqueuses. Déconseillée pour la filtration des protéines lorsqu’un taux de récupération maximum est nécessaire.


Polypropylène (PP)

Très résistante, peut être utilisée avec tous les solvants et acides. La résistance d’un filtre à coque de polypropylène est limitée par la résistance de la membrane filtrante.

 

PVDF

Membrane hydrophobe ayant une bonne résistance aux solvants. Elle est excellente pour la filtration des solvants HPLC, de même que pour la plupart des solutions biologiques. La membrane PVDF est considérée comme étant celle qui présente le plus faible taux d’adsorption de protéines.


PVDF-HLC (hydrophile)

Membrane hydrophile, sans extractibles, ayant une très bonne compatibilité avec les solutions 100% aqueuses. Elle présente un très faible taux d’adsorption des protéines et est par conséquent recommandée pour la filtration des milieux biologiques.


PTFE

Membrane hydrophobe, chimiquement résistante aux solvants, acides et bases. La membrane PTFE ne relargue pas d’impuretés dans le filtrat. Elle est idéale pour la filtration des solvants HPLC non aqueux.


PTFE-HLC (hydrophile)

Membrane hydrophile, sans extractibles, ayant une très bonne compatibilité avec les solutions aqueuses et organiques. Haute résistance au pH et à la température, faible taux d’adsorption des protéines.

 

Fibres de verre (GMF/GF)

Couramment utilisées comme préfiltre dans la plupart des filtrations. Certaines de ces membranes sont employées pour le lavage et la purification de DNA.


Polyéthersulfone (PES)

Membrane hydrophile avec un très faible taux d’adsorption pour les protéines et acides nucléiques. Très forte résistance mécanique de la membrane permettant la filtration rapide de grand volume d’échantillon. Dédiée principalement à la filtration de cultures cellulaires. Compatible avec les alcools et bases fortes.


Nitrocellulose (NO2)

Membrane hydrophile recommandée pour la clarification et filtration d’échantillons aqueux au même titre que les membranes en MEC.

 

Acétate de cellulose (CA)

Membrane hydrophile fréquemment utilisée pour la filtration de solutions aqueuses.
Elle présente un très faible taux d’adsorption protéique. Sa résistance chimique aux solvants est moins importante que celle des membranes RC.

4. Pour rappel :

PTFE : Polytétrafluoroéthylène
PTFE-HLC : Polytétrafluoroéthylène hydrophile
PVDF : Polyvinylidine difluoride
PVDF-HLC : Polyvinylidine difluoride hydrophile
RC : Cellulose régénérée
MEC : Mélange d’esters de cellulose
PES : Polyéthersulfone
NO2 : Nitrocellulose
GF : Fibre de verre
GMF : Micro fibre de verre
Nylon : Polyamide 6
Nylon LE : Nylon à faible taux d’extractibles
PP : Polypropylène
PP-2 : Polypropylène hydrophile
PE : Polyéthylène
UH-PE : Polyéthylène haute densité
CA : Acétate de cellulose

En savoir + :

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Place à la magie : Nous vous souhaitons un très joyeux noël


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Refroidir un milieu réactionnel : problématiques et solutions


Les solutions actuelles pour refroidir un milieu réactionnel :

Certaines réactions chimiques ont besoin d’être réalisées à basses températures sur de longues périodes.
Pour répondre à ces besoins, plusieurs solutions sont actuellement envisageables telles que :

L’utilisation d’un mélange glace – sel

Températures minimales auxquels peuvent descendre les mélanges glace -sel :

  • T ~ 0°C : bain de glace
  • T ~ -10°C : bain de glace (70 %) + chlorure de calcium (30 %)
  • T ~ – 15 °C : bain de glace (80 %) + chlorure d’ammonium (20 %)
  • T ~ – 20°C : bain glace (75 %) + chlorure de sodium (25 %)

Les pourcentages sont donnés en masse

 

L’utilisation d’un mélange solvant organique – carboglace

On peut obtenir aussi des mélanges en réalisant un mélange entre dioxyde de carbone en paillettes (carboglace ou neige carbonique) avec des solvants organiques :

  • T ~ – 23°C : tétrachlorure de carbone/ carboglace
  • T ~ – 60°C : chloroforme/ carboglace
  • T ~ – 78°C : acétone/ carboglace
  • T ~ – 95°C : toluène/ carboglace
  • T ~ – 100°C : éther/ carboglace

 

L’utilisation d’air ou de l’azote liquide ou solvant organique / azote liquide.

  • T ~ – 170 – 180°C

 

Les précautions à prendre et contraintes rencontrées :

Des précautions devront également être considérées pour le maintien de ces basses températures telles que :

  • Isoler thermiquement le système de synthèse utilisé, soit en le recouvrant d’un isolant.
  • Utiliser un Dewar ou un Cool-It.

Malgré toutes ces solutions et précautions, la stabilité de la température du milieu réactionnel ne pourra pas être garantie ce qui peut être gênant pour la réalisation de certains composés comme les acides boroniques.
Les acides boroniques peuvent être obtenus selon une réaction qui consiste à former un magnésien ou un lithien puis à l’additionner sur un ester d’acide borique (Schéma 1) et enfin à hydrolyser l’ester arylboronique obtenu pour récupérer l’acide boronique

Schéma 1 - Addition d’un arylmétallique sur un trialkylborate

Les acides boroniques obtenus à partir d’organolithiens présentent l’avantage de préparer les aryllithiens par ortholithiation, en s’affranchissant du précurseur halogéné.

Il a été aussi été montré que, dans certains cas d’organolithiens peu stables, il est possible de réaliser un piégeage in situ, en ajoutant la base lithiée sur un mélange d’arène et de borate (Schéma 2).

Schéma 2 - Borylation par ortholithiation et piégeage in situ.

Une des limites, pour l’ortholithiation, est que cette réaction doit toujours être réalisée à très basse température (de -78°C à -40°C)  à laquelle risque de s’ajouter les limites liées aux outils actuels, proposés pour travailler à basse température.

Pour des réactions se faisant sur de longues durées et toujours à très basse température, la nécessité d’une surveillance à cause du rechargement fréquents en mélange carboglace /solvant ou azote liquide /solvant par les utilisateurs peut vite devenir contraignant et fastidieux.

 

Repousser les limites avec des solutions efficaces :


Pour repousser ces limites et arriver à réaliser des applications selon des conditions spécifiques à basses températures et sur de longues durées, Interchim propose des solutions efficaces.

Par exemple, pour les applications où la stabilité de la température, l’efficacité de l’agitation sont exigées sur des temps de réactions illimités Interchim propose :

Pour des réactions réalisées dans un ballon de volume compris entre 10ml et 2L :

• L’utilisation du réservoir Cool-It Radleys et du cryoplongeur Huber TC100E

Reservoir incassable Cool-itLe réservoir incassable Cool-it,
en HDPE, s’adapte directement
sur le plateau d’un agitateur
magnétique pour des ballons
à fond rond des volumes allant de 10ml à 250ml.
Cryoplongeur TC100ELe cryoplongeur TC100E
permet le refroidissement rapide
et contrôlé du liquide contenu
dans le réservoir Cool-It et
le maintien de sa température
(T°C max : -100°C) avec une précision de +/- 0,5k.
La combinaison de ces deux systèmes garantie la stabilité de la température du milieu du milieu et une agitation magnétique efficace sur un temps de réaction illimité.

 

Pour des réactions réalisées avec des systèmes de synthèses en parallèles :

• L’ utilisation de réservoirs dédiés aux systèmes de synthèse parallèle Radleys et du cryoplongeur Huber TC 100E

Reservoir incassable Cool CarouselLes réservoirs incassables
Cool Carousel, en HDPE,
s’adapte directement sur le plateau
d’un agitateur magnétique
pour des systèmes de synthèse parallèles 6, 12 et 24 positions.
Cryoplongeur TC100E avec Cool CarouselLe cryoplongeur TC100E
permet le refroidissement rapide
et contrôlé du liquide contenu
dans le réservoir du système
de synthèse parallèle et le maintien
de sa température (T°C max : -100°C)
avec une précision de +/- 0,5k.
La combinaison de ces systèmes garantie la stabilité de la température du milieu du milieu et une agitation magnétique efficace sur un temps de réaction illimité.

 

En savoir plus :

N’hesitez pas à nous contacter afin que nous puissions vous aider à repousser les limites de vos synthèses via la proposition de solutions adaptées.

En collaboration avec son vaste réseau de collaborateurs, Interchim® vous aidera à trouver les outils capables de répondre aux besoins de vos applications pour que votre activité soit encore plus performante et productive.

Caroussel_6_Plus_interchim_blog1218Huber_Temperature_Control_interchim_blog1218

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Pour tout renseignement complémentaire, vous pouvez contacter notre support technique au 04 70 03 73 01 ou par email à interfine@interchim.com.

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Guide : choisir ses marqueurs fluorescents de la surface cellulaire dans les cellules vivantes ou fixées


Logo FluoProbes

La coloration membranaire est très utile pour étudier la délimitation des cellules, la morphologie, le suivi ou la filiation des cellules, dans les études par imagerie multicolore. Les chercheurs sont toujours à la recherche de colorants appropriés à utiliser dans diverses conditions de viabilité, de fixation et de colorations expérimentales dictées par leur application.
FluoProbes® offre un large choix de colorants hautement fluorescents et photostables pour visualiser les structures cellulaires dans les expériences de marquages multicolores. Cet article présente 4 types de marqueurs les plus utiles pour colorer la surface des cellules :

① Colorants classiques :  DiO, DiI, DiA, DiD, DiB et DiR

Schema Colorants ClassiquesLes colorants carbocyanines lipophiles marquent les membranes dans une grande variété de cellules vivantes ou fixes. Procédure de coloration simple, les colorants peuvent être ajoutés directement aux milieux de culture normaux des cellules adhérentes ou en suspension. La coloration est non toxique et stable, avec très peu de transfert de colorant entre les cellules, ce qui les rend aptes au marquage cellulaire, au suivi des populations de cellules en mélange et aux études de fusion cellulaire.

Les cellules peuvent être fixées au formaldéhyde avant ou après la coloration, mais cette dernière tolère mal la perméabilisation ou la fixation au méthanol. Les colorants ne sont donc pas faciles à combiner avec la coloration intracellulaire par immunofluorescence (IF). Les colorants ne fonctionnent pas sur les bactéries ou les levures. Ils sont disponibles du bleu au proche infrarouge :

DIB, blue dye (353/442nm)FP-YS286010 mg
DIO, DIOC18(3) (484/501nm)FP-46805A50 mg
DiA (491/613nm)FP-66096A25 mg
Dil, DiIC18(3) (551/566nm)FP-46804A50 mg
DiD, DilC18(5) (644/663nm)FP-22574A50 mg
DiD, DilC18(5) oil for microinjection (644/663nm)FP-92909A25 mg
DiR, DilC18(7) (748/780nm)FP-69084A25 mg

 

Bibliographie :

BMC_Cell_Biology_interchim_blog1118Khan, J. et al., Aurora kinase-C-T191D is constitutively active mutant, BMC Cell Biology, 13:8 (2012)
 Radiation_Research_interchim_blog1118Lacoste-Collin L. et al., Effect of Continuous Irradiation with a Very Low Dose of Gamma Rays on Life Span and the Immune System in SJL Mice Prone to B-Cell Lymphoma, Radiation Research, Volume 168, Issue 6 (2007)
 BioMed_Research_International_interchim_blog1118Pacor S. et al., Effects of Two Fullerene Derivatives on Monocytes and Macrophages, BioMed Research International, 915130, 13 pages (2015)
 Protein_&_Peptide_Letters_interchim_blog1118Pelillo C. et al., Cellular Internalization and Cytotoxicity of the Antimicrobial Proline-rich Peptide Bac7(1-35) in Monocytes/Macrophages, and its Activity Against Phagocytosed Salmonella typhimurium, Protein and Peptide Letters, Volume 21, Number 4, pp. 382-390(9) (2014)
 Journal_of_Physical_Chemistry_interchim_blog1118Revillod G. et al., Multipolar Contributions to the Second Harmonic Response from Mixed DiA−SDS Molecular Aggregates, J. Phys. Chem. C, 112 (7), pp 2716–2723 (2008)
 Tianqing_Xiong_interchim_blog1118Tianqing Xiong et al., Contamination of Phenylobacterium in several human and murine cell cultures, Acta Microbiologica Sinica, 55(2): 176-186 (2015)

 

② Colorants carbocyanines plus lipophiles : Neuro-DiI, Neuro-DiO

Les colorants FluoProbes® carbocyanines sont conçus pour une diffusion plus rapide dans les membranes cellulaires. Cette propriété est particulièrement utile pour marquer les neurones dans les tissus.

Neuro-DiO, better solubility in membranes (484/501nm)FP-AM331A25 mg
Neuro-DiO in vegetable oil for microinjection (484/501nm)FP-BA641A0,2 ml
FAST DiO Solid; DiO 9,12-C18(3) (485/500nm)FP-96427A5 mg
Neuro-DiI Fast Plasma Membrane Dye (549/565nm)FP-AM330A25 mg
FAST DiI oil for microinjection; DiID9,12-C18(3),
Dilinoleyl DiI (549/565nm)
FP-87188A5 mg
FAST DiI solid; DiI 9,12-C18(3) (550/565nm)FP-12792A5 mg

 

③ Marqueurs de surface cellulaire pouvant être fixées : FP Membrane Marker FX

Ces marqueurs contiennent une amine aliphatique pour pouvoir être fixée par réaction d’un aldéhyde (formaldéhyde, glutaraldéhyde…). Cette série des FPMMarkers complète ainsi les carbocyanines lipophiles, peu compatibles avec la fixation des cellules.

FP Membrane Marker 1-43 FX (510/626nm)FP-T2982A1 mg
FP Membrane Marker 1-44 FX (480/598nm in membranes)FP-AN100A1 mg
FP Membrane Marker 2-10 FX (506/620nm)FP-AM307A1 mg

Bibliographie :

BBA_interchim_blog1118Bucki R. et al., Involvement of the Na+/H+ exchanger in membrane phosphatidylserine exposure during human platelet activation,
BBA – Molecular and Cell Biology of Lipids, 1761:2, p. 195-204 (2006)

 

④ Lectines marquées pour la coloration de la surface cellulaire : WGA et Con A

Conjugués à nos colorants FluoProbes® brillants et photostables, les lectines marquent les glycoprotéines à la surface des cellules vivantes ou fixées. La coloration à la lectine peut également résister à la fixation et à la perméabilisation. Dans les cellules pré-fixées et perméabilisées, les lectines colorent à la fois la surface cellulaire et les organites des voies sécrétoires.
Les lectines WGA et Con A sont largement utilisées pour la coloration de la surface cellulaire dans les cellules de mammifères et sont également utiles pour les colorations de bactéries Gram+ et les levures. La coloration à la lectine peut être dépendante du type de cellule.

FluoProbes® 350 – WGA (353/432nm)FP-A0IKZ05 mg
FluoProbes® 488 – WGA (494/517nm)FP-B0E9G01 mg
FluoProbes® SR101-Con A (583/603nm)FP-MT00005 mg
FluoProbes® 647H – WGA (655/676nm)FP-B0E9F01 mg

Bibliographie :

AEM_interchim_blog1118Midelet G. et al., Transfer of Microorganisms, Including Listeria monocytogenes, from Various Materials to Beef, Appl Environ Microbiol. 68(8): 4015–4024 (2002)

 

Les références et les fiches techniques des Fluoprobes® sont disponibles en ligne sur www.interchim.com.

Pour tout renseignement complémentaire, vous pouvez contacter notre support technique au 04 70 03 73 06 ou par email à interbiotech@interchim.com.

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6 choses à savoir pour une coloration optimale des gels d’acides nucléiques : les solutions GelRed et GelGreen


Six choses à savoir pour une coloration optimale des gels d’acides nucléiques : les solutions GelRed® et GelGreen®

Logo Biotium

Pour une alternative plus sûre au bromure d’éthidium (BET) pour vos gels d’ADN, les GelRed® et GelGreen® sont les seuls colorants de gel imperméables aux membranes cellulaires. Des tests approfondis démontrent que les colorants GelRed® et GelGreen® sont non toxiques, non mutagènes et non dangereux pour leur élimination. En outre, ils offrent une sensibilité plus élevée et un faible bruit de fond.

Schema_interchim_blog0918

L’utilisation la plus courante des colorants d’acide nucléique GelRed® et GelGreen® est dans les gels d’agarose pré-coulés, où les colorants sont ajoutés à l’agarose fondu pendant la préparation du gel.
Cet article aborde les points à garder à l’esprit pour tirer le meilleur parti de ces colorants plus performants à bien des égards, et résoudre d’éventuels problèmes apparus par méconnaissance de leurs spécificités.
Ainsi, en raison de leur plus grande taille conçue pour améliorer la sécurité, la migration des bandes d’ADN dans les gels pré-coulés peut parfois être affectée. Certains échantillons, tels que l’ADN coupé par des enzymes de restriction, peuvent migrer anormalement dans les gels pré-coulés avec le GelRed® ou le GelGreen®.

 

① GelRed® et GelGreen® sont des colorants plus gros que le BET, une caractéristique de conception liée à leur sécurité

C’est la raison pour laquelle l’ADN en trop grande quantité entraîne des bandes courbées (smears), et une migration d’ADN aberrante. La quantité de charge recommandée pour les échantillons de concentration connue ou de marqueurs de poids moléculaire d’ADN est de 50-200 ng / puits. Pour les échantillons de concentration inconnue, la charge de 1/2 à 1/4 de la quantité habituelle d’ADN résout habituellement les problèmes de migration.

Coloration de dilutions en série de ladder d’ADN 1 kb  (200 ng, 100 ng, 50 ng et 25 ng) en gel pré-coulé d’agarose 1% dans un tampon TBE. À gauche : Comparaison du GelRed® et du bromure d’éthidium (EtBr). À droite: Comparaison du GelGreen® et du Colorant Safe.

② GelRed® et GelGreen® sont des colorants ultra-sensibles, plus sensibles que le BET

Des quantités d’ADN faibles (0,1 ng ou moins) peuvent être détectées de manière fiable. Le chargement d’une quantité élevée d’ADN n’est pas nécessaire, et peut entraîner au contraire des problèmes de migration de l’ADN. Un chargement de plus faibles quantités d’ADN donne une meilleure séparation et des bandes plus nettes, économisant les échantillons précieux, les marqueurs d’ADN et diminuant ainsi les coûts.

 

③ GelRed® et GelGreen® donnent une coloration plus homogène et stable à travers le gel

Les  GelRed® et GelGreen®, plus lourds, ne migrent pas à travers le gel aussi vite que le BET. Ainsi ils évitent la perte de coloration, ou la faible coloration des bandes d’ADN de faible poids moléculaire observée avec le BET. Avec les GelRed® et GelGreen®, 1l n’est pas nécessaire d’ajouter un colorant supplémentaire au tampon d’électrophorèse.
Par ailleurs, la coloration par le GelRed est aussi plus homogène entre expériences du fait de sa meilleure stabilité que les colorants ‘Safe’.

 

④ L’utilisation d’un pourcentage de gel plus faible et une capacité tampon plus élevée peuvent améliorer la résolution de bande avec les GelRed® et GelGreen®

Comme les GelRed® et GelGreen® sont des colorants plus gros que le BET, l’ADN de haut poids moléculaire se sépare mieux sur des gels d’agarose à pourcentage inférieur.
Une résolution séparative insuffisante peut aussi être améliorée par un tampon plus fort et salin : Essayez le TBE si vous utilisez le TAE.

 

⑤ Stocker les solutions concentrées de GelRed® et GelGreen® à température ambiante.
Évitez de stocker des gels pré-coulés avec les GelRed® ou GelGreen® à 4°C.

Une faible fluorescence, une diminution de la performance du colorant au cours du temps ou un film de colorant restant sur le gel après la coloration sont des indications que les colorants peuvent avoir précipités, notamment à froid. Chauffer les solutions de colorant à ~ 50°C, et bien mélanger en vortexant.
Les gels précoulés contenant les GelRed® ou GelGreen® peuvent être stockés pendant une semaine ou un mois, respectivement, avant utilisation. Nous recommandons de conserver les gels à température ambiante (et non +4°C qui favorise la précipitation des colorants), dans l’obscurité et notamment s’ils ont été migré.

 

⑥ La post-coloration élimine toute possibilité d’interférence du colorant avec la migration de l’ADN

Avec des gros colorants à haute affinité pour les acides nucléiques comme les GelRed® et GelGreen® qui peuvent affecter la migration de l’ADN pendant l’électrophorèse, la post-coloration des gels est recommandée pour des séparations plus précises et résolutives . La post-coloration est également recommandée pour (i) une charge supérieure de la quantité recommandée d’ADN, (ii) une utilisation de tampons de charge contenant du SDS, qui peut contribuer aux bandes courbées (smears), ou (iii) un problème persistant de migration de bandes dans les gels pré-coulés avec les GelRed® ou GelGreen®. La post-coloration peut prendre de 5 à 30 minutes, selon la quantité d’ADN présente, et la solution peut être réutilisée.

Les références et les fiches techniques des  GelRed® et GelGreen® sont disponibles en ligne sur www.interchim.com.

Pour tout renseignement complémentaire, vous pouvez contacter notre support technique au 04 70 03 73 06 ou par email à interbiotech@interchim.com.

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Comment diversifier vos « lead » et obtenir des analogues avec les kits Hepatochem


Lead Diversification tool box

Illustration_interchim_blog0618

HepatoChem a développé plusieurs kits pour la diversification du « lead » en utilisant la fonctionnalisation C-H. Cette chimie offre de nombreuses transformations telles que l’hydroxylation, l’acetoxylation, la methoxylation et l’halogenation, entre autres. Mais cette chimie peut être parfois complexe.
Les kits HepatoChem vous offrent une solution rapide, pratique et peu coûteuse pour obtenir des analogues. Ils permettent le criblage en parallèle d’un ensemble de conditions catalytiques sélectionnées et permettant de générer une certaine diversité d’analogues avec une approche totalement orthogonale et complémentaire des méthodes synthétiques conventionnelles.

HepatoChem propose différents kits:

  • Alkoxylation and Acetoxylation kits
  • Fluorination kit
  • Biomimetic Oxidation kit
  • Sulfinate Alkylation reagent kit
  • Photocatalytic alkylation diversification kit

 

Alkoxylation et Acetoxylation Kits

Kit de Diversité : 4 fonctionnalisations différentes

L’alkoxylation C-H est une des fonctionnalisation C-H les plus décrite dans la littérature. Le kit HepatoChem est conçu pour permettre facilement le criblage des conditions réactionnelles de l’alkoxylation et l’acetoxylation. Ce kit utilise PdOAc2 comme catalyseur avec plusieurs oxydants et additifs.

Kit HCK1007-01-001 (article 9H4350)
Inclut 2 sets de réactifs ; catalyseur et oxydant sont mélangés dans le même flacon.
La solution de substrat est préparée dans le DMF (pour faciliter le criblage de solvants) puis additionnée aux quatre solvants. Cribler les quatre solvants (méthanol, éthanol, isopropanol et acide acétique) avec trois conditions réactionnelles différents (différents sels). 10mol% Pd(OAc)2, 1 equiv PhI(OAc)2.

TableauKitHCK1007-01-001_interchim_blog0618

Effet des sels sur la fonctionnalisation C-H

Kit d’optimisation : cinq sels différents

Il a été reporté que le sel peut influencer la fonctionnalisation C-H. Le kit HepatoChem est conçu pour le criblage de plusieurs sels simultanément. Ce kit contient cinq sels différents CuOAC2, Ag2CO3, K2CO3, Cs2CO3 et MgSO4.

Kit HCK1007-01-002 (article 9H4360)
Cribler un solvant avec 12 conditions réactionnelles. 10 mol% PdOAc2, 1 ou 2 équivalents de PhIOAc2 avec cinq sels différents. Préparer une solution dans le solvant ou une mixture dans le DMF si problème de solubilité.
Tableau Kit HCK1007-01-002

Fluorination Kit

La fluorination est une des fonctionnalisation C-H les plus intéressantes décrite dans la littérature. Le kit HepatoChem est conçu pour cribler les conditions réactionnelles de fluorination en utilisant PdOAc2  comme catalyseur en présence des sources de fluor les plus communes : Fluorure d’argent AgF, 1-fluoro-2,4,6-trimethyl-pyridinium triflate (TMPyF), SelectFluor®, N-fluorobenzenesulfonimide (NFSI) and Bis(tert-butylcarbonyloxy iodobenzene (PhIOPiv).

Kit HCK1008-01-001 (article APQ9X0)
Ce kit inclut 2 sets of réactifs ; catalyseur et oxydant sont mélangés dans le même flacon

12 conditions avec AgF, TMPyF, Selectfluor and NFSI

Kit HCK1008-01-001

 

Biomimetic Oxidation Kits

HepatoChem a développé une manière révolutionnaire pour cribler, optimiser et produire des métabolites directement à partir des  candidats médicaments. Le kit BMO exploite un panel optimisé de conditions réactionnelles de chimie catalytique avec des catalyseurs organo-métalliques. Cet outil imite la suite des enzymes du cytochrome P450 (CYP) présent dans les hépatocytes humains.
Les kits HepatoChem BMO permettent, en trois étapes simples, la synthèse de métabolites directement à partir du médicament parent.

Biomimetic Oxidation Kits

BMO Screening kit : HCK1001-01-001 (article 9H4040)

Réaliser le criblage primaire. Sélectionner les puits des métabolites désirés. Commander le kit d’optimisation correspondant.
Le kit complet contient tous les solvants et réactifs pour 2×25 conditions réactionnelles de screening (2 plaques incluses).

BMO Optimization kit : HCK1001-02-XXX (article 9H4050)
Utiliser le kit d’optimisation. Identifier les meilleures conditions de production. Commander le kit de production correspondant.
Le kit complet contient les solvants et réactifs pour l’optimisation des conditions réactionnelles de screening sélectionnées (1 plaque incluse).

BMO Production kits : HCK1001-03-XXX-02 (article 9H4060)
and HCK1001-03-XXX-10 (article 9H4070)

Vous pouvez augmenter en quantité et produire votre métabolite.
Le kit complet inclut tous les solvants et réactifs pour votre métabolite à une échelle de 12.5µmol ou plus.

 

Sulfinate Alkylation Reagent Kit

La réaction de sulfinate alkylation décrite par le Prof. Baran est un puissant outil de « late stage functionalization ». Le kit HepatoChem permet la production d’analogues du composé « lead » à l’échelle de plusieurs mg en utilisant six différents réactifs d’alkylation. Chaque flacon réactionnel contient 100µmol de réactif de sulfinate alkylation et un barreau aimanté pour réagir avec 50µmol de substrat. La fonctionnalisation C-H se produit majoritairement sur les hétéroarènes électro-déficients sur une ou plusieurs positions.

Kit HCK1013-01-001 (article AYHDQ0)
Le kit contient : deux flacons réactionnels de chaque réactifs (100µmol), 12 flacons réactionnels au total

Sulfinate Alkylation Reagent Kit


Tableau Sulfinate Alkylation Reagent Kit

 

Photocatalytic Alkylation Diversification Kit

Un kit photoredox est également disponible pour la fonctionnalisation C-H.

La réaction trifluoroborate alkylation (Minisci reaction) décrite par le Prof. Molander est également un important outil par la « late stage functionalization ». Le kit HepatoChem kit permet de produire en une étape huit analogues différents d’un composé « lead » en quantité de l’ordre du mg. La fonctionnalisation C-H se produit majoritairement sur les hétéroarènes électro-déficients sur une ou plusieurs positions.

Kit HCK1016-01-001 (article AYQRA0)
Ce kit contient 2 flacons réactionnels de chaque réactif BF3K (75µmol) et K2S2O8 (100µmol), 2 flacons de photocatalyseurs et 2 flacons de TFA, 16 flacons réactionnels au total

KitHCK1016-01-001_interchim_blog0618

Tableau KitHCK1016-01-001

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Découvrez le puriVap-6™, notre évaporateur simple et smart !


La solution pour vos besoins en évaporation et concentration d’échantillons.

puriVap 6

L’évaporation est une étape essentielle de la préparation de l’échantillon avant l’analyse chromatographique et est couramment utilisée dans diverses applications (pharmaceutique, analyses environnementales, médicale, agro-alimentaire).
Le but principal est d’augmenter la concentration d’analytes (en particulier dans la gamme de ppb (μg / L) ou inférieure) et d’améliorer la limite de détection des composés d’intérêt.
De plus, l’évaporation des solvants est une étape importante dans de nombreuses synthèses chimiques : le solvant utilisé pour générer un produit intermédiaire peut ne pas être compatible avec la prochaine étape de réaction et doit être éliminé.
L’évaporation sous flux gazeux est l’une des techniques d’évaporation les plus fréquentes. Le principe repose sur une injection de gaz inerte (azote) par une aiguille placée au-dessus de l’échantillon créant un vortex uniforme. L’azote accélère l’évaporation en diminuant la pression de vapeur partielle du solvant en surface de l’échantillon. L’utilisation d’azote est préférable à l’air dont les propriétés oxydantes peuvent entrainées une dégradation des composés d’intérêt.

 

Flexibilité d’évaporation

Grâce aux différents accessoires proposés avec l’évaporateur ainsi que le contrôle individuel de chaque position, le choix des dimensions de flacons à évaporer n’est plus une contrainte. En effet, le puriVap-6™ vous permet d’évaporer différentes dimensions de flacons en simultanées.

évaporations simultanées

Des adaptateurs aluminiums placés sur chaque position permettent de travailler sur des flacons de diamètres externes de 12,13,16, 18 et 24,5mm.
La technologie de ces adaptateurs aluminiums  permet de travailler sur deux dimensions de flacons en une seule pièce. Cette solution économique permet de réduire l’investissement
d’accessoires tout en gardant une flexibilité dans le choix des dimensions de flacons utilisés.

Adaptater Tube Flacon

 

Consommation en gaz réduite

Afin de garantir une efficacité maximale sur l’évaporation des échantillons, l’évaporateur puriVap-6™ fonctionne sous flux d’azote couplé à un bloc d’aluminium chauffant jusqu’à 100°C.  L’azote est injecté sous forme de vortex en surface de l’échantillon par l’intermédiaire d’une aiguille dont le débit et la hauteur sont ajustables individuellement. Le réglage de la hauteur permet d’augmenter l’efficacité de l’évaporation mais également de réduire la consommation d’azote (maximum : 6-8 L/min pour 6 positions en simultanées).

purivap concentration purification

 

Contrôle de vos échantillons

L’évaporation d’un échantillon nécessite un contrôle régulier du niveau durant le processus.  Afin de s’affranchir de la contrainte de sortir régulièrement les tubes échantillons pour contrôler l’évolution de l’évaporation, le puriVap-6™ intègre une façade unique permettant un contrôle visuel rapide.

controle echantillons

 

Rapidité d’évaporation des échantillons

Le temps d’évaporation est lié à la composition de votre échantillon. Une présence de solvant dont la température d’ébullition est importante ou une présence d’eau entraine des difficultés à évaporer l’échantillon. Cependant, l’action du vortex d’azote en surface d’échantillon permet de réduire ce temps d’évaporation tout en restant dans une gamme de température de chauffe aux alentours de 40°C. Des évaporations de DMSO ont notamment été réalisées.

SolventBoiling point (°C)Setting temperature (°C)Evaporation time (min)
Methanol64,74021
Acetonitrile825019
Ethyl acetate77,15019
Hexane68558
Methylene chloride39,6407
Water1009050

 

Productivité

L’évaporateur de solvants puriVap-6™ permet également un gain en terme  de productivité grâce au système de fonctionnement en parallèle jusqu’à 6 échantillons en simultanés.

Par conséquent, l’évaporateur de solvants puriVap-6™ vous permettra d’obtenir des évaporations reproductibles et rapides grâce à une technologie réunissant les points essentiels pour faciliter cette étape et reste une alternative de choix face aux automates d’évaporation coûteux.

 

En savoir plus :

Retrouvez le puriVap-6™ sur notre site dédié à la Flash Chromatographie

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Colonnes puriFlash monolith


La purification de composés est toujours un compromis entre pureté souhaitée, la charge de l’échantillon et la durée de méthodes. Pour améliorer l’efficacité dans l’obtention de composés purs, les chimistes doivent trouver le meilleur équilibre entre la pureté, la durée de la méthode, et les considérations environnementales. Cet équilibre délicat est souvent nécessaire aussi bien pour des produits bruts que pour une purification finale.
De par leur structure particulière, les colonnes puriFLash® Monolith apportent des solutions pour tous les points sur lesquels cet équilibre doit être mis en œuvre.

Qu’est-ce qu’une colonne puriFlash® Monolith ?

Les colonnes Interchim PuriFlash® monolith sont des colonnes pré-packées, avec une silice pour chromatographie en phase inverse. Elles vous permettront de réaliser des purifications à très grande vitesse, avec de faibles contre-pressions générées.

Microsoft PowerPoint - BioProcess Poster v3 Final.pptx

Comment les colonnes puriFlash® monolith peuvent –elles fournir de meilleurs résultats ?

Dans les pores de ce monolithe, on distingue deux structures (Macro et micro pores), qui permettent une diffusion plus rapide et plus profonde du solvant à l’intérieur des particules. Cela conduit à des purifications plus efficaces, en particulier pour les macromolécules comme les peptides avec une pression bien moindre que pour une silice conventionnelle.

Une phase 30 µm avec des résultats équivalents à des colonnes 15 µm conventionnelles et une contre-pression bien moins élevée

Utilisées avec les débits optimums, ces colonnes remplies de phase de 30µm vous fourniront des résultats équivalents à une phase 15µm, comme le montre le comparatif ci-dessous.

ColonnespuriFlashMonolith2_interchim_blog0518

Ultra haut débit, pour une meilleure productivité

Augmentez le débit des purifications à la limite de pression de vos colonnes et réduisez considérablement le temps des purifications.
Comme ces colonnes génèrent beaucoup moins de pression, il devient alors possible d’utiliser des débits bien supérieurs au débit optimum de vos colonnes, le tout sans perdre en qualité de séparation pour une productivité hors-normes. Cette application  montre qu’il est possible d’utiliser 10x le débit optimum sans perdre en qualité de séparation. Ce produit permet donc une meilleure productivité.

ColonnespuriFlashMonolith3_interchim_blog0518

Cet avantage peut même être utilisé quand une purification exige de superposer des colonnes pour des purifications difficiles, il sera alors possible non seulement de superposer des colonnes, mais aussi de travailler à des débits bien supérieurs au débit optimum, ce qui n’est pas possible avec une silice conventionnelle.

Exemple :
Echantillons :
1- GLY-TYR 238
2- VAL-TYR-VAL 380
3- Met-Enkephalin 574
4- Angiotensin 1 000
5- Cytochrome c from bovine heart 11749

Method :
Solvant A : Eau + 0.1%TFA

Solvent B : ACN + 0.1%TFA

ColonnespuriFlashMonolith4_interchim_blog0518

Gradient : 5 à 40% d’ACN en 33 :45
Débit : 15mL/min
Pression : 4bar (monolith)
                7 bar (PF-15C18N-F0025)

Pour cette application, les deux colonnes donnent un résultat similaire. Les composés 3 et 4 sont co-élués.

 

ColonnespuriFlashMonolith5_interchim_blog0518

Gradient : 5 à 40% d’ACN en 66 :30
Débit : 15mL/min
Pression : 4 bar (monolith)
                13 bar (PF-15C18N-F0025)

En superposant deux colonnes, on arrive à séparer les composés 3 et 4 mais le temps de run est alors doublé (plus d’une heure) !

 

ColonnespuriFlashMonolith6_interchim_blog0518

Gradient : 5 à 40% d’ACN en 16 :30
Débit : 60mL/min
Pression : 17 bar (Monolith)
                Impossible avec PF-15C18N-F0025

Quand on augmente le débit, même légèrement, la colonne PF-15C18N-F0025 génère une pression trop forte, il n’est donc pas possible de réduire significativement le temps de run.
Au contraire, la colonne monolith permet ici, d’augmenter le débit à 60mL/min (4 fois le débit optimum) et fait passer le temps de purification a 16min.
On note que le gain de temps est conséquent.

Moins de toxicité

Grâce à la faible contre-pression générée, il devient possible d’utiliser des solvants plus visqueux comme l’isopropanol. On se libère alors de solvants toxiques comme l’acétonitrile et le méthanol.
En proportion 1 :1 avec de l’eau, l’application montre que la contre-pression générée reste en dessous de la pression maximale de la colonne F0025.

ColonnespuriFlashMonolith7_interchim_blog0518

 

Un produit performant avec TOUS les systèmes

Avec une contre pression générée inférieure à 2 bar, au débit optimum, il est possible d’utiliser ces colonnes, en phase inverse, sur absolument tous les systèmes de purification. Cela vous permettra d’obtenir une qualité de séparation équivalente à des purifications sur des silices conventionnelles en 15µm, voire d’augmenter le débit pour gagner en productivité.
En plus de cela, pour des purifications difficiles, il devient plus facile de superposer deux colonnes dans le but d’augmenter l’efficacité et d’obtenir des composés séparés plus facilement.

Pourquoi choisir des colonnes puriFlash® Monolith ?

Comme les différents résultats le montrent, l’utilisation de colonnes puriFlash® monolith vous aidera pour :
 – gagner jusqu’à 80% de temps sur vos purifications et décupler votre productivité.
 – utiliser des colonnes de granulométrie 30µm et obtenir des résultats au moins équivalents à des colonnes 15µm.
 – s’affranchir de solvants toxiques comme l’acétonitrile et le méthanol, et même d’utiliser des solvants générant de forte contre-pression comme l’isopropanol.
 – utiliser des colonnes de faible granulométrie sur des systèmes basse pression pour de meilleures performances.

 

En savoir plus :

Retrouvez la liste complète des colonnes ici.

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