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Salut à tous,

Je travaille à ce jour sur le développement de Titansphere Phos-Tio kit. Mes conditions d’analyse sont les suivantes :
Souhaitant concentrer mon échantillon en phosphopeptides, je le fais passer sur la colonne avec une étape d’élution à l’ammoniac. Par la suite, je reprends mon extrait et repasse une deuxième fois sur la colonne avec de l’ammoniac.
Suite à cette préparation, l’extrait est passé en spectro de masse, étape durant laquelle j'ai constaté que ne pas arriver à détecter mes phosphopeptides.
Pourriez-vous m'aider à résoudre ce problème ?

Merci d'avance


Pierre ? Présent...

Salut Pierre,

Je pense que ton problème vient du fait que, lorsque tu effectues ta deuxième étape sur la colonne Titansphere, tu vas re-fixer les phosphopeptides sur le support. Et du coup, tu n'obtiens pas un bon extrait.
Je te propose donc le choix suivant  :
- 1ère étape : déposer l’échantillon avec élution à l’ammoniac 0.5%
- 2ème étape : isoler l’extrait obtenu
- 3ème étape : nouvelle élution en faisant passer de l’ammoniac 0.5% dans la colonne afin de récupérer les phosphopeptides restants dans la colonne
- 4ème étape : rassembler tes deux extraits obtenus et évaporer
Suite à ces étapes, tu pourras tester en injection pour détection sur SM.
Tu peux également réaliser plusieurs tests en effectuant une seule élution à l’ammoniac puis injection en SM, deux élutions à l’ammoniac puis injection en SM, trois élutions à l’ammoniac puis injection en SM.
Cela te permettra de voir l’influence de l’élution à l’ammoniac sur la récupération des phosphopeptides.

Bon courage à toi,
Lola

Oulala comme ton message était long ! Mais il m'a bien aidé

Pierre ? Évidemment encore absent celui-là... Je suppose que Pierre n'est pas là non plus ?