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Problème d'analyse proline, glycine et hydroxyproline

PostPosted: Thu 2 Jun 2016 14:00
by Zab
Bonjour à tous,

Je vous contacte au sujet d'un problème sur l’analyse de molécules de proline, glycine et hydroxyproline.
J'ai actuellement deux colonnes sur ce type d’analyse : Uptisphere PLP et Venusil.
Les structures de mes trois molécules sont très proches, mais avec une différence de polarité. De plus, chaque molécule présente un point isoélectrique assez proche : proline pi = 6.30 ; glycine = 5.97 ; hydroxyproline = 5.83.
Actuellement, je travaille à un pH entre 2.4 et 3
Je pense vous avoir fourni toutes les informations nécessaires.
Merci à ceux qui arriveront à m'aider et à améliorer mon analyse, du point de vue de la séparation et de la résolution ;)

Zab

Re: Problème d'analyse proline, glycine et hydroxyproline

PostPosted: Thu 2 Jun 2016 14:26
by Marc02
Bonjour Zab,

Je redonne ici les valeurs de tes molécules, car elles sont très importantes pour ton analyse (elles vont permettre de fixer un pH suivant le type de greffage de colonne utilisée) : proline pi= 6.30 ; glycine = 5.97 ; hydroxyproline = 5.83.
Sur l’Uptisphere PLP, il y a une chaîne carbonée intégrant un groupement polaire incorporé. Cela permet donc d’avoir des interactions polaires et apolaires types carbone-carbone.
En te plaçant dans la zone de pH 2,4 – 3, tu seras en dessous du point isoélectrique de tes molécules, donc celles-ci seront chargées positivement au niveau de leur fonction –NH et –NH2, car une molécule type acide aminé placée à un pH en dessous du point isoélectrique sera chargée positivement au niveau de sa fonction basique, et chargée négativement au niveau de sa fonction acide si ton pH est supérieur au point isoélectrique.
Ainsi le groupement polaire de l’Uptisphere PLP n’aura pas la réactivité nécessaire pour pouvoir retenir tes molécules, dont les sites polaires principaux seront sous la forme cationique. Seule la partie carbonée du greffage réagira.
Par conséquent, je te conseille de tenter une analyse à un pH entre 5.83 et 6.30 (Résistance Uptisphere PLP : pH entre 2.5 et 7.5). Cela permettrait à tes trois molécules d’être sous leur forme neutre et d’avoir des rétentions sur le groupement polaire.
Ceci est seulement une hypothèse pour essayer d’améliorer ton analyse :)
Grâce à ce pH, tu devrai avoir, dans l’ordre de rétention, la glycine en première puis la proline et enfin l’hydroxyproline, la plus polaire et carbonée.

En espérant que tout ça soit clair pour toi :)
Marc02

Re: Problème d'analyse proline, glycine et hydroxyproline

PostPosted: Fri 3 Jun 2016 09:21
by Zab
Merci d'avoir pris le temps de me détailler tout ça :)