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Problème liaison antigène-anticorps

PostPosted: Tue 21 Jun 2016 11:50
by Jaelle
Bonjour tout le monde,

Je vous explique mon problème : j'essaie de faire des liaisons antigène-anticorps, mais ça ne marche pas...Je pense que mon problème vient des bains à l'éthanol, mais je ne veux pas changer entièrement ma procédure tant que je ne suis pas sûre...

Merci de vos conseils,
Jaelle

Re: Problème liaison antigène-anticorps

PostPosted: Tue 21 Jun 2016 12:08
by Sana
Bonjour Jaelle,

Tu as raison, les bains à l’éthanol sont nuisibles à la liaison antigène-anticorps aussi il serait très vraisemblable que ton problème vienne de là (sans compter que l’éthanol a également un impact sur le fluorochrome).
Il faudrait incuber ton anticorps primaire après le traitement par noir soudan et éthanol.
Mais l’idéal serait évidemment de choisir une fluorescence pour l'anticorps dans une longueur d'onde différente de ton auto fluorescence (généralement le rouge lointain donne d'excellents résultats pour résoudre ce genre de problème)

Tu peux utiliser cette méthode (je te la recommande) :
1. incubation de l'anticorps primaire 1h à RT
2. charger 35ug d’échantillon sur le gel
3. 3x 10min de lavages
4. lancer un gel plus long ou sans gradient de manière à mieux séparer les hauts poids moléculaires (poids généralement attendu pour la protéine : 127kDa, mais il peut être supérieur)

Bon courage :)
Sana

Re: Problème liaison antigène-anticorps

PostPosted: Tue 21 Jun 2016 14:02
by Jaelle
Merci Sana :)