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Diamètre colonne HPLC

PostPosted: Thu 2 Jun 2016 09:13
by Leelou
Bonjour tout le monde ! :D

J'aurais besoin d'acheter de nouvelles colonnes HPLC, mais je ne me souviens plus quelle incidence a la diminution du diamètre interne de la colonne sur mes analyses
C’est une méthode interne, on me demande de réduire la consommation de solvant, la méthode dure 30 minutes
Débit : 1,7ml/min, acétonitrile-Eau 50/50, j’injecte 30µl sur une colonne Uptisphere ODS C18 ODB 5micr 250-4.6mm
Mon collègue m’a confirmé que notre chaine est une HP 1100 binaires et le technicien de maintenance nous a diminué le diamètre des tubulures en 0,13mm (0,005 Inch)

Merci de m'aider !
Leelou ^^

Re: Diamètre colonne HPLC

PostPosted: Thu 2 Jun 2016 09:34
by MathildeHR
Hey Leelou !

Ta question est compliquée car elle implique plusieurs paramètres.
J’ai suivi plusieurs formation HPLC avec des profs de chimie analytique et voici ce dont je me rappelle :
Avec ton appareil, il me semble difficile d’utiliser des colonnes de diamètre 2.1mm. Je pense que ta cellule de détection UV est trop importante en volume (10 -15µl) et donc tu perdras en efficacité et peut être en résolution pour des composés faiblement séparés.
Par contre, les colonnes aux diamètres 3mm semblent tout à fait utilisables mais tu feras moins d’économie de solvant que sur une colonne 2.1mm
Pour ta méthode, je te propose 3 possibilités :
1) tu passes sur une colonne 250x3mm toujours avec une colonne 5microns Uptisphere ODB C18
Alors tu injectes 12µl et tu modifies ton débit à 0,72ml/min (c’est possible car tu ne sembles pas être en gradient d’élution mais en isocratique)
2) Tu passes sur colonne 150x3mm mais en 3microns Uptisphere ODB C18 (interchim possède cette phase)
Normalement tu ne perdras pas en efficacité ni en résolution, de plus tu diminueras ton temps d’analyse autour de 18 minutes
Tu injectes 8µl, et tu gardes ton débit à 0,72ml/min
La pression augmentera 66% soit si t’es à 100 bars sur la 250, tu auras environ 166 bars sur la 150mm en 3µm)
3) Tu passes sur colonne 75x3mm mais en 2.2microns Uptisphere ODB C18
Le temps d’analyse sera de 9 minutes, tu perdras 1,18 de résolution, tu injectes 4µl, et tu gardes ton débit à 0,8ml/min
Tu auras 190 bars.
Pour 500 analyses, ta consommation de solvants passera de 25,5L sur une 250x4.6mm à 3,6L sur la 75x3mm sans perdre ta séparation
En productivité machine, tu passes de 250 heures d’utilisation sur une 250x4.6mm à 75 heures sur 75x3mm, soit 175 heures libres pour faire d’autres analyses.
C’est tout benef et ça vous évite de racheter une nouvelle chaine, c’est ce qu’on a fait dans notre labo depuis 2-3 ans.
Et voilà !

Re: Diamètre colonne HPLC

PostPosted: Thu 2 Jun 2016 10:26
by Leelou
Houla, c’est énorme, je le propose à mon responsable ! Grand MERCI Mathilde ! ;)

Leelou ^^