Purification d'anticorps par affinité

rProtein L™ - agarose

 

  • Fixation sur les chaînes légères kappa sans interférence avec le site de fixation de l'anticorps

  • Purification d'un large spectre de classes et isotypes d'immunoglobulines contenant une chaine kappa : IgG, IgM, IgA, IgE, IgD

  • Purification d'immunoglobulines de nombreuses espèces

  • Ne fixe pas les immunoglobulines de bœuf : idéal pour purifier directement les immunoglobulines dans un milieu de culture contenant du FSC ou de la BSA

Représentation 3D de la structure d'une sous-unité de la rProtéine L

Drs T.Wan, B.J. Sutton et M.G. Gore, université de Southampton, GB.

La Protéine LTM, issue de la bactérie Peptostreptococcus magnus, présente une affinité pour les chaînes légères kappa de toutes les immunoglobulines k, sans interférer avec les sites de fixation des antigènes. La rProtéine LTM reconnaît ainsi une plus grande variété d'anticorps que tout autre support d'affinité existant.

La rProtéine L est une forme recombinante de la protéine native et possède 4 sites de fixation.

La rProtein L, immobilisée sur un support, est adaptée à la purification, immunoprécipitation ou l'absorption. Le gel peut être régénéré plusieurs fois sans perte d'activité. La capacité de fixation est de 5-20 mg IgG/ml gel.

 

Applications

  •  Travaux avec différentes classes d'immunoglobulines de plasma humain (IgG, IgM, IgA, IgE, IgD)

  •  Séparation de fragments Fab, F(ab')2 (kappa) après clivage enzymatique d'IgG, IgM

  •  Séparation d'anticorps à chaine légère lambda, d'anticorps kappa

  •  Purification de fragments, notamment scFv (kappa)

  •  Purification d'anticorps monoclonaux (kappa) issus de surnageant de culture supplémenté en FCS

Informations techniques

Matrice:billes d'agarose réticulé 4%

Granulométrie:45-165 µm

Agent de couplage:bromure de cyanogène

Stabilité du pH: 2-11

Tampon de conservation:PBS (10 mM phosphate

de sodium pH7,2,0,12 M de NaCL) 20% éthanol Capacité de fixation:.5-20 mg IgG humaines / ml de gel

Affinité:  2-3x 109 M-1 IgG humaines

Stabilité: stable au moins 12 mois à +4°C

Les étapes de l'immunopurification

  • Préparation de l'échantillon (dans le tampon de fixation, filtration)

  • Equilibration de la colonne dans un tampon salin

  • Passage de l'échantillon sur la rProtein L agarose: fixation des anticorps, élimination des autres protéines

  • Rinçage de la colonne rProtein L en tampon salin. Seules les immunoglobulines restent accrochées

  • Elution des immunoglobulines fixées. Neutralisation de la fraction pH7,2-7,4

  • Rééquilibration de la rProtein L agarose dans un tampon de conservation
Pour commander:

Désignation

Références

Quantité

Protein L™ - Agarose

201-0,5

0,5 ml 1

Protein L™ - Agarose

201-2

2 ml

Protein L™ - Agarose

201-25

5 x 2 ml

Protein L™ - Agarose

201-10

10 ml

 

Références / Bibliographie

Björck, L. 1988. Protein L _ A novel bacterial cell wall protein with affinity for immunoglobulin light chains. J. Immunol.140, 1194-1197.

Kastern, W. Sjsbring, U and Björck, L. 1992. Structure of peptostreptococcal protein L and identification of a repeated immunoglobulin light chain-binding domain. J. Biol. Chem. 267, 12820-12825.

Nilson, B.H.K., Lögdberg, L., Kastern, W., Björck, L . and Akerström, B. 1993- Purification of antibodies using protein-binding framework structures in the light chain variable domain. J. Immunol. Meth. 164, 33-40

Akerström, B. and Björck, L . 1989. Protein L- an immunoglobulin light chain-binding bacterial protein. Characterization of binding and physicochemical properties. J. Biol. Chem. 264, 19740-19746.
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