IMMUNOcatcher

Cytosignal - Research Products
Système complet pour l’immunoprécipitation de protéines

 

Le système IMMUNOcatcher
IMMUNOcatcher est un système complet pour la solubilisation et l’immunoprécipitation des antigènes protéiques. La technique repose sur l’emploi de filtres centrifuges pour manipuler une matrice de Protéines A et G immobilisées.

Toutes les étapes d’adsorption, lavage et élution des protéines de fusion s’effectuent sur ces filtres qui évitent la chromatographie sur colonne. La purification est ainsi effectuée en moins de 30 minutes.

Incuber le lysat cellulaire avec l'anticorps et la résine de la protéine A/G

Les composants du système HISTAGcatcher ont été optimisés pour aboutir à une technique présentant de nombreux avantages :

  • Rapide : Il est possible de traiter 24+ échantillons en moins de 30 mn

  • Simple : Le filtre centrifuge évite les étapes de resuspension

  • Prêt à l’emploi : Le coffret comprend la matrice d’affinité (Protéines A et G immobilisées), le sérum préimmun, les solutions de lyse et les inhibiteurs de protéases.

  • Flexible : Les solutions fournies permettent de traiter aussi bien les protéines solubles que les protéines insolubles

  • Faible bruit de fond : Les filtres employés sont destinés à l’utilisation en biologie, ils présentent un taux d’adsorption minimal. La spécificité de la purification est fonction de celle de votre anticorps.

  • Rendements élevés : Les protéines fixées sur le gel sont récupérées à plus de 90%

Capture

Collecter la protéine Immunoabsorbée sur la résine

Figure 1. Le protocole IMMUNOcatcher.

Les cellules sont lysées en présence d’inhibiteurs de protéases.

Le lysat est ensuite incubé avec l’anticorps spécifique de l’antigène recherché et la matrice de Protéines A et G immobilisées.

Après 3 brefs lavages et centrifugations, l’antigène est élué.

Centrifugation

  

Laver la résine

Centrifugation

Eluer la protéine purifiée

 

Applications du système IMMUNOcatcher

Détermination d’interactions Protéine-Protéine

L’immunoprecipitation figure parmi les techniques les plus efficaces pour la caractérisation des antigènes protéiques. Le système IMMUNOcatcher a été utilisé avec succès pour différentes applications :

  • Identification d’antigènes dans des lysats cellulaires

  • Caractérisation de modifications post-traductionnelles

  • Détermination des ligands (protéines, acides nucléiques…) interagissant avec un antigène donné

  • Mesure de la synthèse et dégradation protéique

  • Quantification d’antigènes par radioimmunoessai

La co-immunoprécipitation de complexes protéiques est la preuve la plus convaincante de leur interaction physique (Figure 3, pistes 4 & 5). Les conditions optimales de leur interaction peuvent être rapidement évaluées à l’aide du système IMMUNOCatcher.

Commassie

Immunoblot

1

2

3

4

5

Rab 3

Extrait

Figure 2. Immunoprécipitation de Rab3 exprimée dans des cellules transfectées. Gel de gauche : lysat cellulaire coloré au bleu de Coomassie après électrophorèse. Gel de droite : analyse de Rab3 par immunoblot utilisant des conjugués biotinylés anti Rab3

et de la streptavidine-péroxydase.

Piste 1 : lysat de cellules non-transfectées ; piste 2 : protéines immunoprécipitées à partir d’un lysat de cellules non-transfectées ;

piste 3 : lysat de cellules transfectées avec un RNA de SFV contenant une séquence de Rab3 ; pistes 4 et 5 : protéines immunoprécipitées d’un lysat de cellules à l’aide d’un antisérum anti Rab3 (4) et d’un anticorps purifié anti Rab3 (5)

Commassie

Immunoblot

Extrait

retinier

1

2

3

4

5

Gb

Gy

Figure 3. Coimmunoprecipitation des sous-unités Gb et Gg de la G-proteine à l’aide d’un anticorps anti Gg (TF28). Gel de gauche : profil électrophorétique d’un extrait de rétine bovine préparé par lyse douce (coloration au Coomassie). Gel de droite : analyse par immunoblot utilisant un mélange d’anticorps anti Gb et Gg biotinylés.

Pistes 1 et 2 : protéines rétiniennes extraites par des solutions de lyse faible (1)

ou forte (2) ; Pistes 4 et 5 : protéines immunoprécipitées à partir des extraits précédants. Piste 3 : contrôle sans anticorps TF28. Notez que les bandes non spécifiques (pistes 1 et 2) sont éliminées par l’étape d’immunoprécipitation.

 

 

Nature Réf
IMMUNOcatcher (20 tests) C02-020

Contenu du coffret :

20 filtres centrifuges

40 tubes collecteurs

0,25 ml protéine A/G immobilisée

25 ml de solution de lyse (douce)

25 ml de solution de lyse (forte)

0,25 ml de sérum préimmun

1 ml de tampon de dilution SDS-PAGE

Inhibiteurs de protéases

 

Nature Réf
Protéine A/G immobilisée C02-003
IMMUNOcatcher (50 tests) C02-050

Contenu du coffret :

50 filtres centrifuges

100 tubes collecteurs

0,6 ml protéine A/G immobilisée

60 ml de solution de lyse (douce)

60 ml de solution de lyse (forte)

0,6 ml de sérum préimmun

2 ml de tampon de dilution SDS-PAGE

Inhibiteur de protéases

 

Nature Réf
Filtres centrifuges & tubes C00-100

  • 100 filtres centrifuges

  • 200 filtres centrifuges

 

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