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Applications: Dessalage : Changement de tampon, élimination de sels,
détergents, peptides, radioisotopes
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Purification
de proteine,
peptide, PCR…
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Les
protéines, peptides, oligonucleotides, plasmides, carbohyugrates,
lipides ou petites molécuiles organiques peuvent être purifiées
pour analyse
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Principe: Systèmes de
séparation disponibles : gelfiltration, reverse-phase, echangeur d’ions…
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Pratique: Colonnes
déjà packées, prêtes à l’emploi,
-
à
usage unique (pas de régénération)
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Utilisable
avec toute microcentrifugeuse, disponible en format pour 96
échantillons simultanés !
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Fiable: Résultats
reproductibles de colonne à colonne
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4
formats :
Single
spin columns
:
Colonnes
pour traiter vos échantillons au cas par cas
Déposez
votre échantillon en haut de la colonne,
centrifugez,
récupérez les molécules non retenues, ou éluez et récupérez les
molécules purifiées dans un microtube
99-well
spin columns
:
Idéal
pour accélèrer, simplifier et homogéniser la préparation de petits
échantillons !
Déposez
simultannément 96 echantillons sur le dispositif-plaque, centrifugez…
Microtip
Columns :
Ces
microcolonnes s’adaptent directement à vos micropipettes !
L’échantillon
peut etre appliqué en haut de colonne, ou aspiré… De même pour les
étapes de dessalage ou lavage ou élution.
UltraMicroSpinColumns
:
Microcolonnes
pour traiter 5-25µl d’échantillon. Ces colonnes présentent un volume
de phase de 100µl, permettant par ex. de purifier du DNA en très petit
quantité ou être empilées pour des applications spécifiques afin d'obtenir une séparation sélective (selon votre imagination et
ingénuosité, combinez des phases similaires ou différentes !) Des
connections standardisées permettent d’utiliser une seringue ou une
dépression pour remplacer la centrifugation. Ces connections évitent
quasiment toute perte d’échantillon. Le taux de récupération est
reproductible.
MacroSpin
columns :
Mini
colonnes pour traiter 50-150µl d’échantillon
Ces
colonnes présentent un volume de phase de 500µl,
mais
ne peuvent pas être attachées les unes aux autres.
Gelfiltration
:
Idéal
pour dessaler les protéines en conditions physiologiques. Les molécules
sont retardées proportionnelement à leur poids moléculaire sur un tamis
moléculaire.Choisissez les gels en fonction du poids moléculaire des protéines ou
a.nucléique dans le tableau suivant:
|
Limite
d'exclusion |
Protéines
globulaires |
Dextran |
|
Gel
(Sephadex) |
|
|
|
G10 |
7x102 |
7x102 |
|
G15 |
1,5x103 |
1,5x103 |
|
G25 |
1x103
- 5x103 |
5x102
- 104 |
|
G50 |
1,5x103
- 3x104 |
|
|
G100 |
|
|
|
Le
gel G25 est un classique pour déssaler assez grosses (ex.albumine,
Immunoglobulines...) et les oligonucléotides >10mer |
Chromatographie
reverse-phase:
Idéal
pour dessaler des peptides.
Les
molécules sont adsorbées par des interactions hydrophobes sur la silice,
puis eluées par un solvant apolaire
|
Phase
(silice) |
Utilistations |
|
C-18 |
Peptides
de faible poids moléculaire |
|
C-8 |
Peptides
de poids moléculaire élevé |
|
C-2 |
|
|
CN |
|
|
NH2 |
|
Chromatographie
échangeuse d’ion :
Pour
dessaler ou purifier des protéines, peptides.
Les molécules sont
retenues sur le support en fonction de leur charge ionique propre, puis
éluées par un tampon salin.
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Phase |
Utilisations |
|
Chromatogramme
HPLC d'un échantillon préparé sur colonne Ulter Micro Spin:
A-Echantillon:
Mélange de BSA (68000 MW) et de vitamine B12 (1355 MW).
B-Echantillon
A centrifugé sur colonne G-50 : élimination des petites molécules (sels,Vit.
B12...).
C-Echantillon
A centrifugé sur colonne C18 : élimination des macromolécules polaires
(protéines...).
D-Echantillon
A centrifugé sur colonne de Silice. |
|
Echangeur
d'anion fort |
Dessalage
de peptides chargés négativement (Arg...) |
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Echangeur
d'anion faible |
Dessalage
de protéines |
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Echangeur
de cation fort |
Dessalage
de peptides chargés positivement (Lys His) |
|
Echangeur
de cation faible |
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