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Bonjour,

J'ai un problème avec mon contrôle isotypique de lapin qui semble générer du bruit de fond sur mes coupes de tissu humain en IHC. Que puis-je faire?

Merci de votre aide,
Lillia

Bonjour Lillia,

Avez-vous testé l'anticorps secondaire seul (sans AcI, ni contrôle isotypique) sur vos coupes, pour vérifier que le bruit de fond n'est pas du au secondaire ?

Sincères salutations,
Interchim

Oui j'ai testé l'anticorps secondaire seul et je n'ai pas de bruit de fond dans ce cas.

Le problème vient peut-être de votre contrôle isotypique.
Il peut également venir de vos étapes de blocage.
Comment bloquez-vous vos coupes ?

j'ai bloqué mes coupes avec une solution de BSA.

La première étape que nous vous recommandons de vérifier est le blocage (c'est d'ailleurs le paramètre le plus économique à faire varier ).
Vous pourriez peut-être remplacer votre étape de blocage à la BSA par un blocage avec un sérum de la même espèce que l’espèce hôte de votre secondaire.
Savez-vous quelle est l’espèce hôte de votre secondaire ?

Merci de vos suggestions. Je crois qu'il est fait chez la chèvre.

Voici quelques propositions pour vous aider à résoudre vos problèmes de bruit de fond (si votre anticorps secondaire est bien produit chez la chèvre) :
- sérum de chèvre pour le blocage, suivi éventuellement d'une seconde étape de blocage avec des fragments goat anti-human Fab (monovalents)

- autre agent bloquant (SeaBlock )


- autre IgG de lapin contrôle (monoclonale par exemple)

Ci-dessous la liste des produits pouvant vous aider à résoudre votre problématique :

P/N - Produit
AB00178-23.0 - ISOTYPE CONTROL CLONE MOPC-21 RECOMBINANT RABBIT IGG
UP378416 - Rabbit normal IgG
BS-0295P - RABBIT IGG ISOTYPE CONTROL
UP379030 - Normal Goat Serum
109-007-003 - UNCONJUGATED GOAT FAB ANTI HUMAN IGG (H+L)
UP40301A - SEABLOCK BLOCKING BUFFER

merci beaucoup