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Bonjour,

Réalisant des analyses sur des cellules de follicules ovariens, je cherche à colorer les cellules mortes et mourantes en rouge grâce à l'EthDIII, mais je constate des variations de résultats selon les analyses/échantillons.
Auriez-vous une explication et une solution svp ?

Merci,
Porthos

Salut Porthos,

L'EthDIII pénètre assez rapidement dans les cellules et peut donc les colorer en rouge – en quelques minutes si les membranes cellulaires sont compromises, mais ceci vaut pour des cellules libres en suspension ou cultivées, où l'EthDIII a libre accès à toutes les cellules.
Des follicules ont des cellules serrées dans une matrice, qui ralentit la pénétration de l'EthDIII. Il est probable que l'accès aux cellules est alors plus difficile et les cellules mortes seront plus lentement colorées et façon éventuellement plus hétérogènes selon la taille des follicules, ce qui peut expliquer les variations de résultats selon les analyses/échantillons. Aussi, il est possible que les cellules meurent en cours d'observation, et cela retentira sur le résultat selon les opérateurs.
Il peut être préférable de colorer les cellules sur un temps défini puis de les laver pour éliminer l'EthD III en excès. Ainsi les cellules mourantes (et mortes) seront colorées en rouge de façon plus homogène, sans la variabilité dû à la conformation tissulaire, et tu amélioreras la signification/cohérence de tes résultats

Sara J

Merci bien Sarah J