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Bonjour,

J'aurais souhaité obtenir un protocole concernant la préparation d'échantillon sur une matrice biologique (urine ou plasma contenant ma molécule d'intérêt de type oligosaccharide)

Merci à vous,
Van Helsing.

Van Helsing,

Je connais deux voies de travail principales pour ce que tu souhaites faire

- Première approche :
Vérifier la présence de forces ioniques reliant la molécule d'intérêt aux protéines.
Cette hypothèse vérifiée, il est possible d'utiliser les fonctions acides SO3H de ton composé pour apparier un réactif de type appariement d'ion (amine quaternaire + chaîne hydrophobe).
Le but étant de casser les liaisons fortes entre molécule d'intérêt et protéines (plus grande affinité avec le réactif d’appariement d'ion qu'avec les protéines).
SPE : Utilisation du support Recovery C18 pour adsorber le nouveau complexe (composé + réactif)
pH de l'échantillon à définir
Protocole :
Conditionnement : MeOH/H2O
Échantillon : pH à définir pour l'adsorption
Lavage : Eau/MeOH (mélange à définir)
Séchage : 5-10 min
Élution : ACN 100%

- Seconde approche :
Vérifier la présence d’interactions polaires entre ton composé d'intérêt et les protéines.
Utilisation du support UptiClean RPAQ (technologie spécifique qui repousse les protéines et adsorbe les plus petites molécules (moyennement polaires)).
Protocole :
Conditionnement : MeOH/H2O
Échantillon : pH a définir pour l’adsorption
Lavage : Eau/MeOH (mélange à définir)
Séchage : 5-10 min
Élution : ACN 100%

- Analyse HPLC :
Utilisation du support Uptisphere Strategy HILIC 2.2µm.
Le mode HILIC te permets de retenir fortement les composés polaires. Le fait d'ajouter à cette sélectivité la technologie de silices UltraPures 2.2µm donne une efficacité de séparation optimale. Concernant la contre-pression, cette granulométrie reste compatible avec un appareillage LC "standard".

Bien à toi,
Elizabeth

Un grand merci pour cette réponse des plus complète !

Van Helsing