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Foire Aux Questions Anticorps Transduction Laboratories |
Détection de NOS J'utilise votre anticorps anti NOS et ne détecte rien, pas même dans le contrôle positif. Verifiez le Transfert - Les NOS sont de grosses protéines (130, 140 et 155 kD). De nombreux chercheurs utilisent des conditions de transfert optimisées pour des protéines beaucoup plus petites. Transduction recommande un transfert humide équivalent à 1 A pour 1h30, 500 mA pour 3 hr, 250 mA pour 6 hr ou un transfert semi-sec équivalent à 1,2 mA/cm2 pendant 1h45. Ces conditions de transfert permettent l'obtention de blots reproductibles et d'excellente qualité. Difficultés avec l'anti phosphotyrosine Lors de l'utilisation de l'anti phosphotyrosine, j'observe un bruit de fond important et un signal faible. Verifiez le blocage - Les tampons de blocage à base de lait contiennent des phosphates qui vont fixer l'anticorps et sont à l'origine du bruit de fond et des performances moindres de l'anticorps. Détection du CPP32 L'anti CPP32 reconnait-il les produits de clivage actifs de la protéine de 32 kD? Les produits de clivage sont produits lors de l'induction de l'apoptose, la réactivité de l'anticorps n'a pas été testée sur ces protéines. Des publications ont montré que l'anti CPP32 reconnait la protéine active. Fas Ligand Sur les blots réalisés avec cet anticorps, je detecte le Fas ligand dans de nombreux lysats ou je ne m'attendais pas à le trouver. L'anticorps Transduction réagit spécifiquement avec son
antigène. Le fait que le Fas ligand n'ait pas été mentionné
expressement étudié dans certains types cellulaires ne signifie
pas qu'il n'y est pas exprimé. Deux publications récentes
mentionnent l'emploi de cet anticorps : - Potential Involvement of Fas and its ligand in the Pathogenesis of Hashimoto's Thyroiditis. Giordano, C., et. al. Science 275 : 960-963, 1997 (Western blotting). |
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