Marquage HRP

[Vivi]

Salut tout le monde !

Je souhaiterais marquer des protéines à l'HRP (il m'en faudrait 2 mg)

Voici les infos que je peux vous donner à propos de ces protéines :
C'est une protéine recombinante produite chez E. coli.
Concentration de la protéine : 0.1mg/ml
PM : 32.556 KDa. Ce poids moléculaire ne tiens pas compte de l'histag rajouté pour la purification.
Phi : 10.03
Concernant la pureté, je ne sais pas exactement (environ 90%), il doit y avoir des contaminants de Coli.
La protéine est conservée dans un tampon phosphate.
Composition du tampon :
50 mM sodium phosphate
300 mM NaCl
pH 7
500mM Imidazole

Merci pour votre aide !
Vivi

[Clav's]

Bonjour Vivi,

Je pense que ce marquage est réalisable mais il y a quelques problèmes qu'il faudrait pouvoir solutionner avant de lancer le marquage :
1. le problème principal réside dans la concentration de ta protéine. 100µg/ml et 2mg a marquer implique de travailler avec 20ml de solution initiale ce qui est énorme. Il faudrait concentrer la protéine jusqu’à 2-3mg/ml
2. le 2ème problème (moins important) est l'imudazole dans ton tampon : il faudrait s'en affranchir par dialyse.
3. enfin, il faudrait que tu réalises une électrophorèse pour povoir mieux connaître la quantité de PM des contaminants

Bon courage,
Clav's

[Vivi]

Rololololo, encore tout plein de travail
Merci beaucoup pour ta réponse Clav's
Je vais m'y mettre de suite et faire en sorte que ça marche !

Vivi